Методы синтеза аминокислот
Хорошо разработаны методы синтеза аминокислот, меченых изотопами 13N или 15N. В качестве источника метки используют аммиак, содержащий соответствующий изотоп. Для получения аминокислот применяют те же процессы, по которым идет образование аминокислот в живых организмах. Например, в присутствии глута-матдегидрогеназы идет следующая реакция: а-кетоглутаровая кислота + NH3 + НАД-Н -> L-глутаминовая кислота + НАД + HjO. Этот же фермент катализирует образование некоторых L-аминокислот по аналогичной реакции с другими кетокислотами. Таким образом получают аланин, валин, изолейцин и метионин.
Существуют ферменты, катализирующие взаимопревращения амино – и кетокислот. Например, в присутствии соответствующей трансаминазы идет реакция: L-глутаминовая кислота + пировиноградная кислота-»- L-аланин ч – L-кетоглутаровая кислота. Это расширяет возможности ферментативного получения меченых аминокислот.
Рассмотренные нами ранее реакции, благодаря которым осуществляют регенерацию АТФ, используют для получения меченых нуклеозидтрифосфатов. В качестве исходного донора фосфата вводят меченое соединение, содержащее 32Р.
Весьма специфичная область инженерной энзимологии – получение и использование иммобилизованных коферментов. Дело в том, что для функционирования многих ферментов особенно окислительно-восстановительного действия (среди них находятся многие ферменты, катализирующие практически важные реакции), требуется присутствие кофакторов. Мы уже упоминали выше о двух важнейших кофакторах: НАД иАТФ. Эти иизкомолекулярные вещества при иммобилизации ферментов физическими методами не удерживаются на носителе и легко уходят в раствор.