Суть большинства подходов к иммобилизации
Суть большинства из этих подходов в том, что искусственно закрепляют каталитически активную исходную конформацию фермента. Для этого обрабатывают фермент каким-либо сшивающим реагентом, например диальдегидом. Наиболее распространенный реагент – глутаровый альдегид (НОС(СН2)зСОН). В результате его взаимодействия с аминогруппами фермента появляются дополнительные связи между участками; полипептидной цепи, которые и препятствуют ее разворачиванию. Совершенно очевидно, что активная конформация фермента будет стабилизироваться и тогда, когда при иммобилизации белковая глобула будет связываться не в одной, а в нескольких точках. При этом, как и в предыдущем случае, на молекулу фермента будут как бы наложены скобки, скрепляющие его исходную конформацию. Специальные опыты показали, что увеличение стабильности (замедление инактивации) ряда ферментов действительно коррелирует с числом связей между носителем и ферментом.
Третий подход состоит в том, что фермент включают в небольшие «тесные» для него поры носителя. Тогда стенки поры препятствуют разворачиванию глобулы. Этот эффект наблюдали при изучении зависимости скорости инактивации а-химотрипсина от концентрации полиакриламидного геля, в котором он был иммобилизован. Оказалось, что при определенной концентрации ак-риламида (около 50%) происходит резкое падение скорости инактивации. В этих же условиях физическими методами зарегистрировано резкое падение подвижности ферментной глобулы.