Методы иммуноферментного анализа
Уже широко внедряются в медицинскую практику методы иммуноферментного анализа (ИФА). Они предназначены для определения низких концентраций разнообразных биологически активных веществ (лекарств, гормонов и г. д.) по их иммунохимическим свойствам. Дело в том, что попадание в организм постороннего вещества (антигена) вызывает ответную реакцию – выработку антител, предназначенных для вывода антигена. Антитела вырабатываются строго селективно для данного антигена и взаимодействуют с ним в очень низких концентрациях. Этими свойствами иммунной системы и пользуются для создания ИФА. Определять можно как антитела, так и антигены.
В одном из распространенных вариантов ИФА – твердофазном методе, получившем название ELISA (епзуте linked immunosorbent assay), поступают так. Один из компонентов, антитело или антиген, иммобилизуют на поверхности носителя, а определяемое вещество (соответственно антиген или антитело) пропускают через колонку с этим носителем, который предварительно был переведен в комплекс с определяемым веществом, но содержащим ковалентно привязанный фермент – маркёр. Определяемое вещество конкурирует с меченым и гио концентрации «вымытого» фермента вычисляют количество определяемого вещества. Использование именно ферментов как маркёров основано на том же принципе, что и при фотоэнзографии: одна молекула фермента производит много молекул продуктов ферментативной реакции, т. е. фактически можно детектировать достаточно высокие концентрации этих продуктов и обычными физико-химическими методами.